【科技前沿】如何通过口水分析疾病相关基因，miRNA等标记 ...

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唾液研究最活跃的领域之一就是从中寻找上皮细胞和白细胞的DNA进行分析，目前不少科学家们正在唾液中寻找与囊肿性纤维化（囊性纤维化）、自闭症和其他疾病相关的基因。像是Oasis Diagnostics公司就已经验证了其设备DNA•SAL 能用于多种遗传疾病和患病风险的检测，其中包括戈谢氏病、地中海贫血症和心血管疾病等。
健康成人三个主要腺体每天大约要分泌1至1.5升的唾液，这些唾液中大部分是水，其它成分还包括电解质和蛋白质，例如形成粘液，分解食物和细菌的酶，以及分泌抗体所需的糖蛋白等。


虽然唾液相对于血液来说，更加容易收集，存储和运输，也更便宜，但是相关的流体研究和新型唾液，口腔诊断技术却并不方便和简单。因此设计相关的实验需要考虑已商业化可用的工具，合适的流程，稳定性，以及出现问题的策略。这些因素都会影响你的结果，尤其是如果你希望能定量分析的话。近期The Scientist杂志就总结了几位唾液研究专家，分享他们的秘诀。

前文：唾液收集与实验操作指南（一）


分析对象是什么


DNA


唾液研究最活跃的领域之一就是从中寻找上皮细胞和白细胞的DNA进行分析，目前不少科学家们正在唾液中寻找与囊肿性纤维化（囊性纤维化）、自闭症和其他疾病相关的基因。像是Oasis Diagnostics公司就已经验证了其设备DNA•SAL 能用于多种遗传疾病和患病风险的检测，其中包括戈谢氏病、地中海贫血症和心血管疾病等。


其它也有不少公司除了提供样品收集工具，也提供保存唾液样品的提取试剂盒，此前发表在Journal of Visualized Experiments上的一个操作手册就详细介绍了从唾液中提取DNA，用于新一代测序技术分析的全过程。


此外，尽管唾液成分各有不同，但是大约30%唾液口水中的DNA来自于口腔中的细菌。NEB公司有一种细菌DNA富集提取试剂盒：NEBNext Microbiome DNA Enrichment Kit，采用一种新方法将微生物DNA与宿主DNA分离，降低测序成本。


RNA


利用RNA能检测到除了口腔疾病之外的疾病，来自加州大学洛杉矶分校的David Wong等人发现唾液中的某些RNAs与口腔以及其它癌症发生有关，文章标题为：Salivary microRNAs and oral cancer detection，采用的方法是绘制唾液miRNAs图谱，同时这篇文章也介绍了一种样品收集工具（可收集核酸和蛋白），即RNAPro•SAL。此外还有其他一些研究人员研发了从唾液细胞中分离RNA的方法（High-Yield RNA-Extraction Method for Saliva）。


唾液中大部分RNA也是来自于口腔中的细菌，Wong研究组的一项成果指出增加一步低速离心，能提高测序的深度，减少细菌RNA的干扰（The Human Salivary RNA Transcriptome Revealed by Massively Parallel Sequencing）。

多肽和蛋白质


约30%在血液中发现的蛋白也会出现在唾液中，具体包括细胞因子、激素、生长因子和抗体等。研究人员也正在评估唾液蛋白作为潜在炎症、阿尔茨海默氏症和糖尿病的可能性。从技术上值得注意的是，蛋白也与RNA一样，容易受到酶的攻击，因此需要不同的收集方法。

如何收集


总体来说唾液收集没有统一的方法，这要考虑到参与实验人员的年龄，以及即将进行何种实验。而这种收集方式，以及样品在口腔中位置和收集时间会造成影响。


不同唾液分析物收集的一个金标准就是Passive drool，即实验参与者让口腔中的唾液自然汇集，然后身体前倾，让其流入一个试管中，但是这对于一些患者来说并不容易。


当研究人员的研究对象是早产儿和新生儿的时候，那么就需要婴儿的一个最常见的动作：吸吮，不过现在临床研究人员研发了一种Pedia•SAL新工具，这种设备能与安抚奶嘴连接在一起，帮助收集婴儿唾液。


还有一些工具也能通过吸取唾液进行收集，关键在于找到一个适合你目标分子的工具，“我们都知道如果用泡沫或棉花吸收唾液样本，有可能会以我们不知道的方式改变样品的完整性。因此根据你的目标分子来决定样品是否能用，”亚利桑那州大学跨学科唾液生物科学研究所所长Douglas Granger说，他同时也是Salimetrics 的创始人。

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